Наименование вещества

Теофиллин (1,3-Диметилксантин)

Структурная формула

Основные физические константы

Малорастворим в холодной воде (1:180), легко - в горячей (1:85), растворим в кислотах и щелочах;

Проба

Сыворотка (плазма)

Экстрагент

хлороформ + изопропанол (95:5)

Хроматограф

Миллихром-4

Колонка

Колонка набита насадкой – Сепарон С-18 RPS с размером гранул 5 мкм

Элюент

А – ацетонитрил:вода=15:85 Б – ацетонитрил

Градиент

No

Объем пробы

20 мкл

Длина волны

270 нм

Скорость потока

100 мкл/мин

Время выхода

4 мин (400 мкл)

Градуировочные параметры (усредненные наблюдавшиеся)

В колонке, нг 2000 500 200 100 33
D, mAU 2660 780 315 150 49

Предел обнаружения

Около 10 нг в колонке - до 100 нг/мл пробы

Кратко подробности (порядок операций, времена, аппаратура)

К 0.5 мл сыворотки крови добавляется 0.5 мл 1 N соляной кислоты. Смесь перемешивается. К полученной смеси добавляется экстрагент. Экстракция ведется на протяжении 25 минут путем энергичного встряхивания.
После этого органическая фаза отделяется центрифугированием при 1000 об/мин на протяжении 60 минут. Слой органической жидкости отделяется пипеткой, после чего фильтруется (фильтр синяя лента). Фильтровальная бумага дополнительно промывается порцией хлороформа (до 2 мл).
Отфильтрованный экстракт упаривается в стеклянных пробирках на водяной бане до объема 1.5 мл, после чего переносится в пластикоые пробирки с крышечкой (Eppendorf), где упаривается досуха. Сухой остаток растворяют в 200 мкл 0.03 н соляной кислоты.
Степень экстракции при соотношении объемов водной и органической фаз 1:10 составляет 0.85.

Метод получен от НПП “Наука Плюс
21027, Украина, г. Винница, 27, а/я 3032


Назад